视黄醇标准品配置
视黄醇（维生素A醇）标准品的配置需要严格的操作以避免其光解和氧化，以下是详细的配置步骤及注意事项：

1. 试剂与仪器准备

• 标准品：视黄醇（纯度≥98%，建议使用Sigma-Aldrich等品牌）。
• 溶剂：无水乙醇（HPLC级）或甲醇（避光保存）。
• 抗氧化剂：0.1% BHT（丁基羟基甲苯，溶于乙醇）。
• 器材：棕色容量瓶（10mL）、移液枪、氮气吹扫装置、铝箔纸、超声波仪。

2. 标准溶液配制步骤

（1）母液配制（1 mg/mL）

• 称量：精确称取10 mg视黄醇（避光操作，快速称量）。
• 溶解：转移至10 mL棕色容量瓶，用含0.1% BHT的无水乙醇定容，超声助溶（≤30℃）。
• 保存：充氮气密封，-20℃避光保存（有效期1个月）。

（2）工作液稀释

• 梯度稀释：用母液逐级稀释至所需浓度（如10 μg/mL、1 μg/mL），每次稀释均使用含BHT的溶剂。
• 示例：
  • 取100 μL母液（1 mg/mL） + 9.9 mL溶剂 → 10 μg/mL。
  • 取1 mL 10 μg/mL溶液 + 9 mL溶剂 → 1 μg/mL。

3. 关键注意事项

• 避光操作：全程在棕色玻璃器皿中操作，避免日光或强光照射。
• 惰性环境：溶液配制后充氮气或氩气，减少氧化。
• 溶剂选择：优先使用乙醇（毒性低），若用甲醇需确保无水。
• 稳定性验证：现配现用，HPLC检测峰面积变化（降解＞5%需重新配制）。

4. 应用示例（HPLC检测）

• 色谱条件：
  • 色谱柱：C18反相柱（如Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18）。
  • 流动相：甲醇:水（95:5，v/v）。
  • 检测波长：325 nm（视黄醇最大吸收波长）。
• 标曲绘制：配置0.1–10 μg/mL系列浓度，线性回归R²＞0.99。

5. 常见问题解决

• 峰分叉：可能为溶剂不纯，更换HPLC级溶剂。
• 回收率低：检查样品是否见光降解或氮气保护不足。
• 出峰时间漂移：调整流动相比例或柱温（建议30℃）。

通过以上步骤可确保视黄醇标准品的准确性和重现性。如需长期保存，建议分装为单次用量并冷冻避光。