1. 测定条件
- 溶剂：常用无水乙醇或正己烷（避免水干扰）。
- 波长：视黄醇在 325 nm 附近有最大吸收峰（乙醇中）。
-
摩尔吸光系数（ε）：
- 在无水乙醇中，ε₃₂₅ ≈ 52,300 L·mol⁻¹·cm⁻¹（文献值，需验证标准方法）。
- 不同溶剂或温度可能导致ε略有差异。
2. 浓度计算公式
根据朗伯-比尔定律：
[
A = ε \cdot c \cdot l
]
- ( A )：吸光度（325 nm处测定值，需调整浓度使吸光度在0.2~0.8线性范围内）。
- ( ε )：摩尔吸光系数（L·mol⁻¹·cm⁻¹）。
- ( c )：待测浓度（mol/L）。
- ( l )：光程（cm，通常为1 cm比色皿）。
浓度计算：
[
c = \frac{A}{ε \cdot l}
]
3. 实验步骤
- 配制标准溶液：精确称量视黄醇，用无水乙醇溶解并定容（避光操作，防止降解）。
- 测定吸光度：在325 nm处测定吸光度（空白溶剂调零）。
- 验证线性范围：通过稀释确保吸光度在标准曲线线性区间内。
- 计算浓度：代入公式，结合ε值计算实际浓度。
4. 注意事项
- 避光操作：视黄醇对光敏感，需在暗室或棕色玻璃器皿中操作。
- 溶剂纯度：乙醇需无水（水分可能影响吸收峰）。
- 温度控制：ε值可能受温度影响，建议25℃下测定。
- 标准品验证：使用高纯度视黄醇标准品（如Sigma-Aldrich等品牌）。
5. 示例计算
若测得吸光度 ( A = 0.5 )，ε = 52,300 L·mol⁻¹·cm⁻¹，光程 ( l = 1 ) cm：
[
c = \frac{0.5}{52,300 \times 1} ≈ 9.56 \times 10^{-6} \text{ mol/L} \quad (≈ 2.74 μg/mL，视黄醇分子量286.45)
]
6. 参考文献
- 美国药典（USP）或国际标准方法（如AOAC）。
- 文献：Journal of Agricultural and Food Chemistry 等分析化学期刊。
如需更高精度，建议使用HPLC结合紫外检测器进行验证。
