视黄醇标准品配制
视黄醇(维生素A醇)标准品的配制需要严格避光操作,因其对光和氧敏感。以下是详细步骤和注意事项:
一、试剂与仪器
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试剂
- 视黄醇纯品(≥98%纯度,HPLC级)
- 无水乙醇或甲醇(HPLC级)
- 抗氧化剂(如BHT,0.1%)
- 氮气(高纯)
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仪器
- 棕色容量瓶(10mL、50mL等)
- 微量天平(万分之一)
- 超声波振荡器
- 移液枪(避光枪头)
- HPLC系统(用于浓度验证)
二、配制步骤
1. 母液配制(1 mg/mL)
- 称量:精确称取10 mg视黄醇纯品(用棕色称量皿避光)。
- 溶解:转移至10 mL棕色容量瓶,用无水乙醇定容,超声助溶(30℃以下)。
- 保护:加入BHT至终浓度0.1%,充氮气密封,-20℃避光保存(有效期约1周)。
2. 工作液稀释(如10 μg/mL)
- 取100 μL母液(1 mg/mL)至10 mL棕色容量瓶,用乙醇定容,现配现用。
三、注意事项
- 避光操作:全程在红色安全灯或遮光环境下进行,容器需棕色或铝箔包裹。
- 抗氧化:BHT可延缓氧化,氮气置换瓶内空气。
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溶剂选择:
- HPLC分析:优先用甲醇(与流动相兼容)。
- 溶解性不足时可加少量氯助溶(需验证兼容性)。
- 浓度验证:用HPLC-UV检测(波长325 nm),对比标准曲线确认实际浓度。
四、常见问题
- 降解迹象:溶液变黄或出现沉淀需弃用。
- 低温保存:-20℃分装冻存,避免反复冻融。
如需进一步优化(如内标法、不同基质适配),请提供具体应用场景(如食品、血浆检测)。